Tecnica de Willis

OBJETIVO: Aprender a realizar diferente métodos para la identificación y estudio de los parásitos en este caso la búsqueda de huevos y quistes.

FUNDAMENTO: Willis en 1921, describe este método basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor de hacer flotar objetos menos densos.Este método esta recomendado específicamente para la investigación de protozoarios y helmintos, consiste en la preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Método de concentración por flotación simple.

·         Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias como quistes, huevos y helmintos.

·         Se evalúa una gran porción de la muestra.

·         Sensibilidad alta.

·         Fácil rápida y económica.

Es un método de concentración por flotación simple:
en este caso se usa salmuera.
Consiste en preparar el material fecal con Solución saturada de ClNa.
Utilidad
Recomendado especialmente para la investigación de geohelmintos.
Por su sencillez se puede utilizar en el campo, donde no se cuentan con demasiados materiales o reactivos para realizar otros métodos.
Los Huevos de helmintos de peso específico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lámina colocada en contacto con la superficie del líquido.
Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana.
Limitaciones
los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a adherirse a un cubreobjetos colocado

MATERIAL:

·         Vaso de precipitado

·         Embudo

·         Tubo de ensaye

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         abate lenguas

REACTIVOS

·         Sol. Saturada de NaCl

·         Sol. De yodo lugol

PROCEDIMIENTO:

1.- Tomar aproximadamente1gr de heces fecales con un abate lenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezclar con 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.

3.-En un tubo de ensaye filtre la mezclar con una gasa, llenando completamente el tubo.

4.-Coloque un portaobjetos sobre el tubo de manera que el líquido haga contacto con el portaobjetos.

5.-Esperamos de 5 a 10 minutos.

6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del prtaobjetos que esta en contacto con la mezcla.

7.-Colocar una gota de yodo lugol en el porta objetos y colocar el cubreobjetos.

8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo 40x, buscamos quistes o huevecillos de parásitos.

9.-Reportar los resul_tados   

OBSERVACIONES

En esta practica realizamos dos muestras diferentes, en la primera no encontramos nada interesante solo logramos ver restos de alimentos y en la segunda un campo de quistes en especial de Entamoeba histolitica.

 

"MÉTODO DE C.P.S DIRECTO O EN FRESCO"

"MÉTODO DE C.P.S DIRECTO O EN FRESCO"

Practica 1.  Parasitologia.

I.- INTRODUCCION
Como sabemos uno de los primeros microscopistas fue Antón Van Leewenhoek y a mediados del siglo XVll fue el primero en utilizar este método al observar directamente en sus propias heces fecales, trofozoítos de Giardia lamblia.
El método que necesita menos equipo y el más sencillo de realizar, corresponde a las preparaciones húmedas, que se hacen directamente con muestras de heces. Para las preparaciones directas de heces frescas o no preservadas, los exámenes ordinarios se hacen con solución salina isotónica y lugol. Si se emplean heces preservadas, el formol sirve de diluyente. Las preparaciones no teñidas son de especial valor para el estudio de parásitos vivos, como trofozoítos de protozoarios móviles, huevos de helmintos y larvas de nematodos . El lugol se emplea principalmente para la búsqueda e identificación de quistes y larvas, con base a sus características.
La mezcla normal en el tracto intestinal por lo general no asegura una distribucion uniforme de trofozoítos de protozoarios moviles, huevos de helmintos y larvas de nematodos. Sin embargo el examen de materia fecal directo o en fresco pueden revelar o no parásitos, dependiendo de la intensidad de la infección.

ll.- FUNDAMENTO
La solución salina isotónica dá las condiciones adecuadas para que la células se mantenga viva. El medio ideal para todo tipo de parásito que pueda encontrarse en las muestras de heces en cualquier etapa de su desarrollo, es la solución salina fisiológica, y el lugol en la practica ha demostrado su eficacia para la tinción e identificación de parásitos intestinales.

lll.-  MATERIAL
- Muestra fecal
- Aplicadores de madera
- Portaobjetos de 25 x 76 mm.
- Cubreobjetos
- Solución salina isotónica 
- Lugol parasitológico

lV. TECNICA
- En un portaobjetos colocar una gota de solución salina isotónica
- Con la punta del aplicador tomar una pequeña muestra de aproximadamente 1 a 4 mg. de heces fecales.,  en muestras con moco y sangre elegir esta parte para estudiar.
- Mezclar procurando hacer una suspensión en preparación delgada no un frotis.
- Quitar de la suspensión fibras y otros fragmentos grandes.
- Colocar el cubreobjetos lentamente procurando no dejar burbujas.
- Examinar al microscopio en forma sistemática, a seco débil y a seco fuerte.
- Repetir la operación con una gota de lugol en lugar de la solución salina.

FORMA DE REPORTAR
Primero se escribe la fase o estadio y enseguida el nombre del parásito, con el genérico iniciando con mayúscula u el específico con minúscula , subrayándolo o escribiendo con otro tipo de letra.
Por ejemplo:
Huevos de Ascaris lumbricoides.
 

KAREN IVONNE GOMEZ HERNANDEZ. 

"TÉCNICA DE FAUST"

"TÉCNICA DE FAUST"

Práctica 2. Parasitologia

"TÉCNICA DE FAUST"

OBJETIVO
Buscar en las muestras biológicas la presencia

de los distintos parásitos para tener un conocimiento más amplio sobre ellos.
FUNDAMENTO:
Se conoce como técnica de Faust, ya que fue él quien la diseño en 1938. Es una de las más populares, se utiliza prácticamente en todos los laboratorios del sector salud y privados.
Ventaja y Desventajas
Esta técnica es mejor para quiste y protozoos que para huevos y larvas de helmintos. El éxito depende de la exactitud en la densidad del sulfato de Zinc. El contacto prolongado con el sulfato de zinc, puede deformar los quiste y dificultar su identificación, por lo tanto estas preparaciones debe ser examinan lo antes posible

MATERIAL

·         Porta objetos.
·         Cubreobjetos.
·         Gasas.
·         Tubos de ensayo.  
           Embudo
           Solución acuosa de sulfato de Zn.
           Vaso de precipitado
           Abate lenguas

    Muestras biológicas
·         Heces
 
PROCEDIEMIENTO
1) Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.
2) Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.
3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1min.
4) Decantar el liquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Re suspender el sedimento.
5) Repetir el procedimiento hasta 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.
6) Decantar nuevamente el líquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 minutos por 1500 rpm.
7) Tomar de 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del liquido. Colocarlos en un porta-objeto y mezclar con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre-objeto
8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

*OBSERVACIONES*
En la primera muestra solo logramos identificar grasa, ya que el dueño de la muestra no estaba enfermo

KAREN IVONNE GOMEZ HERNANDEZ. 

"TÉCNICA DE FAUST" "Bis"

"TÉCNICA DE FAUST" "Bis"

Práctica 2. Parasitología

OBJETIVO

Buscar en las muestras biológicas la presencia de los distintos parásitos para tener un conocimiento más amplio sobre ellos.
FUNDAMENTO:
Se conoce como técnica de Faust, ya que fue él quien la diseño en 1938. Es una de las más populares, se utiliza prácticamente en todos los laboratorios del sector salud y privados.
Ventaja y Desventajas
Esta técnica es mejor para quiste y protozoos que para huevos y larvas de helmintos. El éxito depende de la exactitud en la densidad del sulfato de Zinc. El contacto prolongado con el sulfato de zinc, puede deformar los quiste y dificultar su identificación, por lo tanto estas preparaciones debe ser examinan lo antes posible

MATERIAL

·         Porta objetos.
·         Cubreobjetos.
·         Gasas.
·         Tubos de ensayo.  
           Embudo
           Solución acuosa de sulfato de Zn.
           Vaso de precipitado
           Abate lenguas

    Muestras biológicas
·         Heces

PROCEDIEMIENTO
1) Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.
2) Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.
3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1min.
4) Decantar el liquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Re suspender el sedimento.
5) Repetir el procedimiento hasta 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.
6) Decantar nuevamente el líquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 minutos por 1500 rpm.
7) Tomar de 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del liquido. Colocarlos en un porta-objeto y mezclar con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre-objeto
8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

OBSERVACIONES
En una de las dos muestras solo se logro identificar fibra.

KAREN IVONNE GOMEZ HERNANDEZ 

"Método de concentración por 

sedimentación"

Ritchie
FUNDAMENTO:
Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda del formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Soluciones:
·         Solución salina isotónica
·         Solución de formaldehido al 10%
·         Éter

MATERIAL:
·         Centrifuga
·         Tubos de ensaye cónicos 15ml.
·         Gasas cortadas en cuadros
·         Embudos pequeños de cristal
·         Vasos de precipitado 50 ml.
·         Aplicadores de madera
·         Abate lenguas
·         Pipetas Pasteur con bulbo
·         Portaobjetos
·         Cubreobjetos
·         Microscopio
Reactivos biológicos del ser humano:
·         Heces (de un paciente que tenga diarrea o mucosidad)


MÉTODO:
1)    Se coloca un poco de materia fecal en el vaso de precipitado aproximadamente 1gr o empíricamente el tamaño de una nuez pequeña esta se coloca con ayuda del abate lengua, se añaden 10ml de solución salina y esta se mezcla.
2) Se filtra la suspensión a  través de la gasa colocada en el embudo esta doblada en 4 partes, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
3)  Se centrífuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm., se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con la solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más. 
4)    Al último sedimento se agregan 5ml de solución de formaldehido al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
5) Se añaden después 0.5 ml. De éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente durante 30 segundos.
6)    Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm.



7)    Después de centrifugar se observan 4 capas:
·         Éter superficial
·         Restos fecales
·         Formaldehido
·         Sedimento en el fondo del tubo.
8)    Se decanta el sobrenadante, se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
9)    Se le añade una gota de yodo lugol y este se cubre con el cubre objetos de manera que se puede observar que estos se homogenizan.
  
10)  Estos se observan en el microscopio con el objetivo seco débil (10X) y seco fuerte (40X)
 RESULTADOS:
En la muestra solo se lograron observarse residuos de grasa.

CONCLUSIONES:
logramos observar quistes o huevecillos de algún parásito, al igual lo que se observo fue grasa. Esperamos que para la siguiente ocasión ya se logren identificar otras cosas interesantes.

KAREN IVONNE GOMEZ HERNANDEZ. 

"TÉCNICAS MACROSCÓPICAS COPROPARASITOSCÓPICAS: TAMIZADO"

"TÉCNICAS MACROSCÓPICAS COPROPARASITOSCÓPICAS: TAMIZADO"

 

"TÉCNICAS MACROSCÓPICAS COPROPARASITOSCÓPICAS: TAMIZADO"

*OBJETIVO
 Aprender a realizar la técnica macroscópica de tamizado, para identificar helmintos que pudiesen estar presentes en las muestras de heces.

*FUNDAMENTO
El tamizado es un método físico para separar mezclas. Consiste en hacer pasar una mezcla de partículas de diferentes tamaños por un tamiz o colador. Las partículas de menor tamaño pasan por los poros del tamiz atravesándolo y las grandes quedan retenidas por el mismo.
Es un método muy sencillo utilizado generalmente en mezclas de sólidos heterogéneos. Los orificios del tamiz suelen ser de diferentes tamaños y se utilizan de acuerdo al tamaño de las partículas de una solución homogénea, que por lo general tiene un color amarillo el cual lo diferencia de lo que contenga la mezcla.
Para aplicar el método de la tamización es necesario que las fases se presenten al estado sólido. Se utilizan tamices de metal o plástico, que retienen las partículas de mayor tamaño y dejan pasar las de menor diámetro.
En parasitología la técnica de tamizado es usada para detectar a los parásitos que pudiesen quedar atrapados (trematodos, cestodos, nematodos). Esta, permite observar  directamente las características morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados.
MATERIAL:
·         Coladera de tamiz fino
·         Abatelenguas
·         Caja Petri
·         Pinzas
·         Portaobjetos
·         Cubreobjetos
·         Microscopio

*SUSTANCIAS:
·         Agua
·         Solución salina al 0.9%
·         Muestra biológica: heces fecales frescas

*PROCEDIMIENTO

1.    Colocar pequeñas porciones de materia fecal en el tamiz con ayuda del abatelenguas.

2.    Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado lo más limpio posible.

3.    Revisar cuidadosamente las partículas de las heces que hayan quedado en la coladera..

4.    Los parásitos encontrados se colocan en una caja Petri con solución salina. Para fines didácticos, se vació todo el tamizado en la caja Petri para facilitar su observación.

5.    Se identifica al parásito, parte o estructura sospechosa de ser parásito.

6.    Se reporta el género y la especie del parasito. Si no se puede identificar macroscópicamente, se usa el microscopio para una mejor identificación.

KAREN IVONNE GOMEZ HERNANDEZ.